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溶酶体染色试剂盒是利用L系列探针进行溶酶体特异性染色的试剂盒。
L系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的溶酶体体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记溶酶体。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性溶酶体上。可有效标记活细胞。
本试剂盒中的L04溶酶体染色探针能选择性定位于溶酶体，L04的荧光性在低pH值时不会降低，在低pH时，L04发出强烈的黄色荧光。这种独特pH依赖荧光使得L04能做为理想的溶酶体探针，除了选择性标记溶酶体外，还可以用来检测溶酶体内pH值的变化。
L04溶酶体黄色荧光标记的溶酶体探针，具有384/540nm的最大激发/发射波长。
检测方法：
● 流式细胞仪● 荧光显微镜● 激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞● 贴壁细胞
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦● 离心机● 移液器● PBS（pH7.4） ● HBSS（不含酚红）

产品组成	125T	250T
试剂A：溶酶体黄色荧光L04染料	50μL	50μL×2
试剂B：染料稀释液	10mL	20mL
说明书	1份	1份

染料-20℃避光保存；避免反复冻融；稀释液2～8℃保存。有效期6个月。
注：
● 染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。


● L04染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
● 最好使用HBSS缓冲液（含Ca2+、Mg²⁺ Hank’s平衡盐溶液）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。
● L04染料具有环境敏感性，环境发生改变L04会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。
● 染色后立即进行分析。
● 操作过程中需要尽量避光。
● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。


1、染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将L04荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基50倍稀释，配制成染色工作液。
注：
● 也可以不用试剂盒所配的稀释液，直接用HBSS等缓冲液或相应的培养基500倍稀释L04染料母液至所需工作浓度。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 开始实验前，使用HBSS或培养基缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度500倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和溶酶体毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度过高也可能造成非特异性染色，对其他细胞结构进行染色。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号衰减和细胞空泡化现象。
2、细胞染色
2.1对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞。加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育30分钟～120分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
注：
● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液。
注：
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或激光共聚焦显微镜下观察。最大激发/发射波长为384/540nm。
2.2对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。或激光共聚焦显微镜检测。最大激发/发射波长为384/540nm。
注：
● 对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸（poly-D-lysine）包被载玻片或盖玻片。
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
相关搜索：溶酶体染色试剂盒(橙色荧光)-L04